急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童最常见的恶性血液肿瘤，通常疗效及预后佳。但T细胞急淋（T-ALL）约占所有儿童ALL的15%左右，其危险度高、进展快及预后差，故而T-ALL的发病机制及治疗靶点成为重点研究方向之一。 组蛋白甲基化酶复合物2（PRC2）血细胞生成的关键调控因子之一，其核心组分包括SUZ12、EED以及EZH2，在接近25%的T-ALL患者中存在PRC2组分的基因突变。

该研究共纳入60例原发性T-ALL患儿，并通过靶向基因测序发现，在12例T-ALL患儿中检测到PRC2组分的基因突变（共14个），分别为EZH2突变 (8/60)、SUZ12突变 (4/60)以及EED 突变(2/60)。通过回顾分析发现，伴有PRC2突变T-ALL患儿的骨髓原始细胞比例更高，为88.5% vs 81.72%, P = 0.026。

随后，通过RNA测序发现，在12例伴有PRC2突变的患儿中，FLT3的表达量明显上调，显著高于PRC2未突变的T-ALL患儿。此外，通过qRT-PCR方法进一步证实了FLT3的上调与PRC2突变存在特异性关联（详见图1），并且

EZH2突变（PRC2组分之一）的T-ALL患儿FLT3上调最为明显。

图1：PRC2突变的T-ALL患儿中，FLT3表达水平显著高于正常T细胞及未突变的T-ALL 

为进一步探索FLT3表达水平与PRC2突变之间的调控关系及机制，该研究通过CRISPR/Cas9技术对T-ALL细胞系Jukat的EZH2基因（PRC2组分之一）进行敲除。然后，通过Western-Blot的方法发现：在EZH2基因敲除的Jukat细胞中，FLT3表达及磷酸化水平显著上调（详见图2）。此外，FLT3信号通路明显激活，下游的STAT5、AKT以及 ERK表达水平增高（详见图3）。

图2：敲除EZH2基因的PRC2突变Jukat细胞（JE010/014/031）中磷酸化FLT3水平明显上调

图3：在敲除EZH2基因的PRC2突变Jukat细胞（JE010/014/031）中，FLT3信号通路明显激活，磷酸化的STAT5、AKT以及 ERK表达水平增高。 

在调控机制方面，该研究通过Chip-qPCR的方法证实了EZH2基因的敲除可导致H3K27me3表达下调及RNA聚合酶II（POLII）升高并在FLT3基因启动子区域结合，进而调控转录活性、调节FLT3的表达（详见图4）。

图4：可见H3K27me3表达下调及RNA聚合酶II（POLII）升高

此外值得注意的是，在EZH2基因敲除的T-ALL细胞中，即便已出现磷酸化的STAT5、AKT以及 ERK表达水平增高，但在应用FLT3抑制剂（索拉非尼、奎扎替尼）之后，STAT5、AKT以及 ERK表达水平可下调。并且，与PRC2未突变的T-ALL细胞相比较，FLT3小分子抑制剂索拉非尼（Sorafenib）和奎扎替尼（Quizartinib）对伴有PRC2突变的T-ALL原代细胞疗效更为敏感，这表明FLT3抑制剂是潜在治疗PRC2突变T-ALL患者的靶向药物。

该研究通过多种实验方法（靶向测序、基因敲除+Western-Blot、Chip-qPCR及药物试验）、在多层面上阐述了T-ALL患儿中PRC2突变与FLT3信号通路的关系。明确的证实了FLT3是PRC2突变T-ALL患儿的潜在治疗靶点，有利于指导儿童T-ALL患者的精准治疗，改善儿童T-ALL的疗效及预后。