时间： 2018年12月1日  3:15 PM  

地点： Grand Ballroom 7 (Marriott Marquis San Diego Marina)

讲者：中国医学科学院血液学研究所  周文教授    

类型：Oral Abstract（192）

p53缺失是多发性骨髓瘤（MM）患者的独立预后因素。既往研究发现，NEK2异常高表达与MM患者的预后不良和耐药密切相关。然而，NEK2如何在MM中上调的机制目前未明。通过生物信息学分析，在NEK2启动子中可发现p53蛋白的结合位点，但p53和NEK2在MM中的关系和功能尚不清楚。

在本研究中，p53 -/ - MM细胞系（ARP1和KMS11）和p53 + / + MM细胞系（MM1S和H929）用于研究NEK2在p53 - / - MM细胞中的作用。在MM原代细胞的间期细胞核上进行FISH以检测p53和NEK2拷贝数。应用染色质免疫沉淀和荧光报告系统检测远端NEK2启动子中p53蛋白的结合位点。进行CGH和RNA-seq以验证拷贝数变化和几种转录物表达的变化。

在化疗期间，TT2和TT3患者（GSE2658）中最高10％的具有最高NEK2表达和最低p53的MM患者的OS显著较差（P <0.001），并且NEK2的表达在骨髓瘤细胞中显着增加（GSE19554）。虽然p53随着疾病进展而减少，但表明p53与耐药性有很强的关系。单细胞PCR显示，NEK2表达增加与单个CD138 +浆细胞中p53表达降低相关。FISH证实了CD138 +浆细胞中p53的丢失与NEK2拷贝扩增相关。NEK2也通过免疫荧光（IF）在p53低表达的MM细胞中高表达（P <0.01）。此外，NEK2在p53 - / - MM细胞系和HEK293细胞中通过缺失p53基因和CRISPR技术在mRNA和蛋白水平上调（P <0.01），表明p53与NEK2表达水平之间呈负相关关系。同时，当p53缺失和NEK2过表达同时发生时，不对称有丝分裂和多极分裂的现象更为明显（P <0.001），这表明p53缺失和NEK2过表达的双重打击增加了染色体不稳定性。

进一步的体内研究表明，p53缺失和NEK2过表达组的皮下肿瘤发生明显高于单克隆过表达和p53组缺失组（P <0.001），提示NEK2过表达和p53缺失增强体内致瘤能力。在p53缺失细胞中通过shRNA下调NEK2，在体外和体内抑制细胞生长。为了探索p53和NEK2之间的关系，染色质免疫沉淀和荧光报告系统显示p53可以结合NEK2的启动子区域和调节其转录表达。对HEK293细胞中p53表达缺失的进一步CGH分析发现，p53表达缺失可以直接引起NEK2染色体区域的1q21.4-44扩增，这进一步通过FISH证实。最后，RNA-seq揭示了几种染色体不稳定基因在NEK2过表达和p53缺失双重打击组中的异常表达。

总之，p53缺失和NEK2过表达诱导癌细胞耐药、增殖和染色体不稳定。p53可与NEK2的启动子区结合并引起NEK2扩增。p53缺失细胞中shRNA对NEK2的下调，在体外和体内均抑制细胞生长。因此，该研究揭示了NEK2抑制剂的临床前应用的重要性，以克服p53在MM中诱导治疗的耐药性。