医微客 - CRISPR基因敲除后，还能检测到蛋白表达，这该如何解决？

CRISPR基因敲除后，还能检测到蛋白表达，这该如何解决？

临床医学

2023-11-07

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在建立基因敲除（KO）细胞株后，我们必须对细胞株进行充分的验证，以确保细胞株构建成功。除了采用常规的PCR、测序等方法外，蛋白水平的Western blot（WB）验证也尤为重要。你有没有经历过，WB鉴定蛋白与PCR测序结果不一致？WB结果中无信号或显示信号弱？

在WB验证中，偶尔会出现测序鉴定为KO纯合子但WB检测却显示有蛋白残留。出现这种情况的原因众多，其中由外显子的可变剪切引起的蛋白残留是最为复杂的，其影响因素包括细胞系的类型，靶基因和细胞的培养环境等。总的来说，蛋白残留跟gRNA的设计、基因（或mRNA）的可变剪切、WB抗体的选择等因素都密切相关。

不过无需担心！针对这些疑难杂症，11月9日（周四）晚7点，赛业生物细胞基因编辑生产经理范丽莉将带来「基因敲除细胞蛋白水平验证的挑战和解决方案」线上课程，从基因敲除细胞系构建、细胞株验证等多个应用场景展开，为大家详细讲解基因敲除细胞系鉴定方法与技术特点，以及优化gRNA设计、提高编辑效率的实验技巧，通过具体操作案例分析实现体外疾病模型构建的创新策略。

赛业生物自主开发的细胞基因编辑系统Smart-CRISPR™，是基于人工智能技术所建立的综合算法，通过最优的gRNA设计，结合抗体分析，及阶段性WB测试等策略，为您提供科学的解决方案，让您不再为KO细胞蛋白残留问题而发愁。“码”上报名，相约云端，参与课程将有机会获得蓝牙耳机、数据线、小鼠公仔等惊喜好礼！