HPV感染是宫颈癌发生发展的主要危险因素。HPV-16 E6、E7蛋白在表型转变的发生和维持方面必不可少。这些癌蛋白能够影响多种细胞内蛋白的功能，包括那些控制PI3K/AKT/mTOR通路的蛋白质，在这个通路中磷脂酶D（PLD）和磷脂酸(PA)起关键作用。

向人原代角质形成细胞中转染HPV-16 E6、E7突变基因，测定其磷脂酶D（PLD）的活性。通过单层细胞培养和器官型培养，评估雷帕霉素（一种经典的mTOR抑制剂，具有潜在临床应用价值）的抑制效果。

人原代角质形成细胞中HPV-16 E7蛋白的表达，导致磷脂酶D的表达量和生物活性的增加（图1）。这一激活作用依赖于E7蛋白诱导视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）的降解（图2）。另外，表达HPV-16 E7蛋白的细胞和沉默Rb基因的细胞都产生了对抗雷帕霉素抑制增殖作用的抗性（图3）。

图1：HPV-16 E7蛋白提高磷脂酶D的表达和生物活性
a、Western-blot分析不同基因转染的角质形成细胞中磷脂酶D的表达量；
b、磷脂酰基转移反应分析不同基因转染的角质形成细胞中磷脂酶D的活性；

图2：pRb蛋白下调导致磷脂酶D激活
a、Western-blot验证对pRb的沉默效果；
b、pRb沉默后磷脂酶D的活性升高；

图3：100ng/ml雷帕霉素作用下转染E7基因和空载体对照细胞株的生长曲线

图4：模式图—HPV-16 E7蛋白通过抑制pRb，提高磷脂酶D活性，促进磷脂酸的产生，与雷帕霉素竞争性结合mTOR蛋白，促进细胞增殖。

本研究证实了HPV-16 E7蛋白能够影响磷脂酶D活性。作为磷脂酶D的产物，磷脂酸能够干扰雷帕霉素与mTOR的结合作用，影响其药效（图4）。所以，联合药物靶向作用于磷脂酶D与mTOR可能有助于治疗HPV相关恶性肿瘤。