随着免疫治疗的广泛应用，越来越迫切的需要优化免疫反应检测技术，帮助医生根据患者的免疫状态为其制定更能获益的免疫治疗策略。因此，为了实现更好的免疫检测，研究者在单细胞水平鉴定了多发性骨髓瘤（MM）免疫微环境中能够具有临床意义的细胞亚群。

研究者应用半自动管道技术来揭示不偏倚细胞群体的整体细胞多样性，所应用的数据库来源于入组GEM2012MENOS65 临床试验的231例多发性骨髓瘤患者从诊断到VRD诱导、自体造血干细胞移植和VRD巩固治疗的二代流式免疫检测结果。T细胞的进一步特点检测应用17色流式并结合单细胞（sc）RNA/TCR测序。同时分析了整体的数据库，在MM免疫微环境中无偏移地鉴定了25个细胞群（包括9个髓系和13个淋巴细胞群）。经过对每一个细胞群的富集得到至少120种免疫细胞参数，并检测了不同时间点的细胞之间的比例。

研究者观察到了一套预后积分，包括CD27-/CD27+T淋巴细胞的比例（HR:0.21, p=0.013）和ISS（HR:1.41, p=0.015），优于其余任何单独参数（HR:0.06, p=0.007）。为了进一步验证CD27-/CD27+T淋巴细胞比例的生物学重要性，研究者应用9个MM患者的标本共对44969个细胞进行单细胞RNA/TCR测序。 下游分析揭示CD27-T淋巴细胞几乎均为CD8阳性，其中包括衰老细胞、效应性细胞和耗竭细胞群。与之相反，CD27+T淋巴细胞主要是CD4阳性T淋巴细胞和剩余的CD8+T淋巴细胞（免疫抑制表型为主）。应用17色流式结果印证这些T细胞群，并再次证实单细胞RNA测序得到的细胞分群结果，并观察到CD27+T细胞与CD27-T细胞相比高表达PD1、TIGIT、BTLA 和TIM3免疫耗竭的抗原。同时，单细胞TCR测序的结果揭示了患者的中位克隆类型数目为12个。有趣的是，大多数克隆类型来源于CD27-细胞群中（74/90），而不是在CD27+细胞群，应用VDJB数据库分析得到效应性/耗竭性CD27-T细胞克隆类型的CDR3序列能够预测性的识别已知的MM相关表位，如MLANA、HM1.24 (CD319)或IMP2。在选择的患者中，研究者同时进行了肿瘤的exome- 和RNA-测序，并分析了其HLA特点。应用来自IEBD分析数据的T细胞表位-MHC结合预测工具源，发现了突变基因的表达（如UBXN1, UPF2, GNB1L）能够预测肿瘤细胞上MHC I类分子和潜在的CD27-T细胞表达的自体克隆类型相结合。

本研究首次展示了对MM潜在的反应性T细胞是CD27阴性的T细胞，而且这些细胞在新诊断MM患者免疫微环境中富集的数量可以判断预后，这可能与应用IMiDs和自体移植后的反应具有相关性。由于二代流式技术已经得到广泛应用，因此这些结果可以用于效应性T细胞的免疫检测。