作者：蒋静，曹志红，肖漓，李彬钰，俞珊，杨秉芬，刘艳华，翟斐，王若，程小星

第一作者及单位：蒋静，解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所，器官移植与免疫调节北京市重点实验室；曹志红，解放军总医院第八医学中心结核病医学部，结核病防控重点实验室，结核病诊疗新技术北京市重点实验室

通信作者及单位：程小星，解放军总医院第八医学中心结核病医学部，结核病防控重点实验室，结核病诊疗新技术北京市重点实验室

Tim-3 expression is induced by mycobacterial antigens and identifies tissue-resident subsets of MAIT cells from patients with tuberculosis.

Jiang J, Cao Z, Xiao L, Li B, Yu S, Yang B, Liu Y, Zhai F, Wang R, Cheng X.

Microbes Infect， 2022 Jul 7:105021.

doi: 10.1016/j.micinf.2022.105021.

PMID: 35811063.

研究背景

结核分枝杆菌（MTB）感染导致的结核病（TB）是主要的传染病致死原因之一。据估计全球约有1/4的人口感染结核分枝杆菌，但只有少数感染者在其一生中最终发展为结核病，宿主免疫系统在抗结核感染中发挥关键作用。黏膜相关恒定T细胞（mucosal-associated invariant T cells, MAIT cells）是一类可表达由TRAV1-2基因编码的恒定TCRα链的先天样T细胞。MAIT细胞的识别是由MHC I类相关蛋白（MR1）提呈的微生物合成核黄素代谢物和其他配体，通过MR1的依赖性和非依赖性途径生成细胞因子和细胞毒性分子而对分枝杆菌抗原发生应答，可能在抗结核免疫中起到了重要作用。

研究发现·

一、结核性胸腔积液中组织驻留MAIT细胞的鉴定

根据CD69和CD103的表达来鉴别组织驻留MAIT细胞，发现健康对照者和结核病患者外周血中CD69+ CD103+ MAIT细胞的比例均非常低，但结核性胸膜炎患者胸腔积液中该群细胞的比例则明显增高。功能分析表明，体外结核分枝杆菌裂解物刺激后，结核性胸腔积液中的CD69+ CD103+和CD69+ CD103- MAIT细胞亚群能够生成IFN-γ的细胞比例明显高于 CD69- CD103- 细胞亚群。该结果表明，结核病患者胸腔积液中存在CD69+ CD103+组织驻留MAIT细胞，且能生成高水平的IFN-γ。

二、Tim-3+ CD69+ CD103+组织驻留MAIT细胞产生IFN-γ和颗粒酶B的比例增高

为了研究结核病患者中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim-3）的作用，通过流式细胞术分析MAIT细胞中Tim-3的表达。当无结核分枝杆菌抗原刺激时，Tim-3+ MAIT细胞的比例相对较低，但在体外结核分枝杆菌抗原刺激后，MAIT细胞中的Tim-3表达明显增高，且结核性胸腔积液中抗原刺激Tim-3+ MAIT细胞的比例明显高于健康对照者和结核病患者外周血。该结果表明，MAIT细胞中存在低水平的Tim-3表达，体外抗原刺激能明显诱导Tim-3的表达。细胞内染色显示，结核分枝杆菌抗原刺激后，与Tim-3- CD69+ CD103+相比，Tim-3+ CD69+ CD103+ 组织驻留MAIT细胞生成IFN-γ和颗粒酶B的细胞比例增高。

三、CD39+ CD69+ CD103+组织驻留MAIT细胞产生颗粒酶B的比例增高

无结核分枝杆菌抗原刺激时，健康对照者和结核病患者外周血中CD39+ MAIT细胞的比例相似，但明显低于结核性胸腔积液。结核分枝杆菌抗原刺激导致表达CD39的MAIT 细胞比例略有增加，结核性胸腔积液明显高于健康对照者和结核病患者外周血。功能分析表明，与CD39- CD69+ CD103+细胞亚群相比，结核分枝杆菌抗原刺激后的CD39+ CD69+ CD103+组织驻留MAIT细胞中IFN-γ+细胞的比例相似，但生成颗粒酶B的细胞比例增高。

四、Tim-3+和 CD39+ MAIT细胞与结核病患者临床特征的相关性

分别对胸腔积液中Tim-3+和CD39+ MAIT细胞与年龄、性别、胸腔积液中腺苷脱氨酶 （ADA）、乳酸脱氢酶 （LDH）、总蛋白、葡萄糖和氯化物浓度、细胞总数和单核细胞比例以及结核病变范围进行相关性分析。Tim-3+ MAIT细胞的比例与结核病患者TB病变范围相关，但CD39+ MAIT细胞比例与此无关。结果提示，结核性胸腔积液中Tim-3+ MAIT细胞比例可能与结核病的严重程度相关。

五、Tim-3的表达受IL-2、IL-12p70和IL-18的调节，而CD39表达不受影响

为了确定Tim-3和CD39的表达是否受到细胞因子的调节，在结核分枝杆菌抗原刺激过程中分别向培养基中加入抗白细胞介素（IL）-2、IL-12p70、IL-15和IL-18的阻断抗体。与同种型抗体对照相比，阻断IL-2、IL-12p70或IL-18可导致Tim-3的表达明显降低，而IL-15没有产生影响。相反，阻断上述细胞因子的阻断抗体并不能影响CD39的表达。

研究结论

结核性胸腔积液中Tim-3+CD69+CD103+组织驻留MAIT细胞增多，且生成IFN-γ和颗粒酶B效应分子的能力增强。

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供稿：曹志红

编辑：孟    莉

审校：范永德

发布时间：2022-08-05