HER2检测方法包括IHC和FISH。IHC法主要检测是否存在HER2蛋白过表达，而在FISH检测中可发现多种HER2：CEN17突变方式。然而根据N9831试验结果，两者的检测结果会存在差异。

2007ASCO/CAP指南指出IHC法示HER2蛋白3+（>30%浸润癌细胞出现均一的细胞膜染色）或FISH示HER2/CEP17>2.0表示HER2基因扩增，需接受曲妥珠单抗治疗。

然而，根据一些重磅试验，HER2/CEP17=2.0~2.2的患者赫赛汀治疗也是有效的。因此2007版指南关于HER2/CEP17=1.8~2.2、肿瘤内部HER2扩增异质性、以>30%替代既往>10%细胞染色定义为HER2蛋白3+是否合适等问题均未作出解答。

2013年版指南针对上述问题作出了进一步的阐释。该指南指出IHC3+定义为>10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；2+：有两种情况，第一种为>10％的浸润癌细胞呈现不完整和／或弱至中等强度的细胞膜染色，第二种为≤10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色，这种病例应该用ISH做进一步检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送条件更好的中心实验室进行检测。FISH结果中，当HER2／CEP17比值≥2.0时，为HER2阳性；HER2／CEP17比值<2.0，但平均HER2拷贝数／细胞≥6.0时也为HER2阳性。需要注意的是对于HER2／CEP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数／细胞≥4.0<6.0的病例建议使用不同探针再检测或选取新的标本重新检测。

然而，2013版指南中，关于IHC 2+的定义仍不清晰，对于HER2／CEP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数／细胞<4.0的病例是否应该视为ISH阳性目前尚存一定争议。有些机构会对HER2：CEP17≥4.0<6.0标本利用17p单探针重新检测，这会增加HER2阳性率；有些认为HER2：CEP17≧2<4的阳性的HER2拷贝数不足；而一些HER2>6病例IHC 是0或1+。但对于粗针活检标本中HER2阴性的病例，必须对术后标本重新进行HER2检测。

ASCO/CAP将于明年初公布HER2检测更新指南，此次指南更新是针对2013版指南中关于HER2状态无法确定等问题作出进一步解答。Jenkins教授指出此次指南更新是基于临床试验数据或大型回顾性研究分析结果的。2016年发表的几篇关于HER2检测的文献结果与2013年版指南内容相悖，这促使指南委员会重新评估现有文献并根据更新数据作出每项推荐指引。

根据研究结果，对于HER2／CEP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数／细胞<4.0的病例，IHC多数表现为HER2阴性，没有证据显示该组患者预后较第5组患者的差，因此这部分病人没有曲妥珠单抗使用指征。